标签蛋白纯化|蛋白纯化-卡梅德生物

2023-12-28 13:28:10

? ? ? ?标签蛋白纯化技术是一种在蛋白表达体系中引入特定标签,通过对这一标签的专一性识别,实现目标蛋白的高效、可追踪纯化的方法。

? ? ? ?标签蛋白纯化是通过在目标蛋白中引入特定序列或结构的标签,利用这一标签与其它分离手段的相互作用,实现对目标蛋白的高效纯化的技术。这一方法广泛应用于分子生物学、生物医学研究和蛋白制备领域。

1、蛋白标签的选择

标签名称

优点

缺点

六组氨酸标签(His-Tag)

与金属离子亲和层析结合,适用于金属螯合层析,操作简便。

在某些情况下可能引起非特异性结合。

谷氨酰胺标签(GST-Tag)

适用于谷氨酸亲和层析,结合力较强。

可能对某些蛋白产生影响,不适用于某些结构敏感的蛋白。

褐藻糖蛋白标签(Strep-Tag)

结合力较强,对目标蛋白的结构影响小。

耗费成本较高。

抗体标签(Flag-Tag、HA-Tag等)

适用于免疫亲和层析,对结构影响小。

需要高质量的抗体。

2、标签蛋白纯化流程

①、设计表达载体:将选定的标签序列合并到目标蛋白的表达载体中。

②、表达宿主的选择:选择适当的表达宿主和系统,确保高效表达目标蛋白和标签蛋白。

③、蛋白表达:将构建好的载体导入宿主细胞,通过培养和诱导实现蛋白表达。

④、细胞裂解和蛋白提取:利用适当的细胞裂解方法将蛋白从细胞中提取。

⑤、亲和层析:利用选定标签的亲和性,采用相应的层析方法对蛋白进行纯化。

⑥、洗脱和纯化:利用洗脱缓冲液将目标蛋白从亲和树脂上洗脱,并经过适当的纯化步骤。

3、标签蛋白纯化注意事项

①、标签的位置:标签的选择和放置位置需根据目标蛋白的结构和性质进行合理设计。

②、标签的对目标蛋白的影响:一些标签可能会对目标蛋白的结构和功能产生影响,需要谨慎选择。

? ? ? ?标签蛋白纯化技术是一种通过在目标蛋白中引入特定的标签,再利用对这一标签的高亲和性识别,从而实现对目标蛋白的高效纯化的方法。这种技术使得研究人员能够方便、快速地获得高纯度的蛋白,为生物学研究和生物制备提供了重要的工具。

文章来源:https://blog.csdn.net/g20231908/article/details/135198698
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