【卡梅德生物】稳定细胞系构建的原理及流程

? ? ? ? 稳定细胞株构建的基本原理：

? ? ? ?首先改造原始细胞基因组，通过基基因编辑工具，使改造后的细胞拥有某些特定表型，并经过抗性筛选或其他筛选方法，使其表型能够长期稳定传代。

? ? ? ? 构建稳定细胞株的实验流程：

? ? ? ? 首先将外源基因构建至载体(注：此载体必须带有抗性，且需与目的基因共表达)，随后将构建好的质粒线性化以便于整合到细胞基因组。接着进行细胞转染，常用的转染细胞的方式有多种，包括化学介导（脂质体转染），生物介导（病毒转染），物理介导（电穿孔及基因枪法）、基因枪法等。

? ? ? ? 转染结束后即可得到细胞池，加入抗生素筛选得到稳定转染阳性克隆细胞株。筛选后的混合克隆稳转株细胞进行稀释培养，挑取单一细胞生长而成的细胞克隆，获得单克隆株。除此之外，通过对细胞池进行压力筛洗可得到高表达的稳定细胞株。

图1构建稳定细胞系的实验流程

? ? ? ? 稳定细胞株具备很多优势，可以弥补瞬转使得目的基因易丢失的的缺点，使得外源基因持续稳定表达或构建干扰特定基因表达的细胞株，适用于各种研究应用，如重组蛋白和抗体生产、基因编辑、功能性研究等等。但是构建周期长、难度大。目前，“慢病毒感染——药物筛选法”已经被医学研究领域已广泛采用进行稳转细胞株的构建，其已成为构建稳转细胞株最流行的方法。

? ? ? ? ?卡梅德生物在稳定细胞株构建上拥有丰富的经验，熟悉每一步操作，尤其对关键步骤有独到的经验，成功为众多科研客户构建目的细胞株（过表达、可诱导过表达、沉默、可诱导沉默、报告基因等等）。