【卡梅德生物】蛋白表达：关于酵母载体的介绍

? ? ? ?酵母载体主要包括酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)和毕赤酵母(Pichia pastoris)等两大类。

? ? ? ?毕赤酵母则因其高效表达、易于纯化等优点，被广泛用于生产各种重组蛋白制剂。卡梅德生物的酵母分泌表达系统采用的宿主是巴氏毕赤酵母（Pichia pastoris），该表达系统是近年来发展迅速、应用广泛的一种真核表达系统。

? ? ? ?毕赤酵母是甲醇营养型酵母菌，被乙醇氧化酶（Alcohol oxidase, AOX）基因控制，其被两种基因编码，即AOX1和AOX2。其中AOX1在控制乙醇氧化酶活力中占据主导，由于菌株利用甲醇生产蛋白，也就是合成速度主要AOX1由蛋白控制。因此甲醇严格控制AOX1表达，当只有AOX2存在，AOX1缺失时，乙醇氧化酶的活力基本丧失,这种细胞利用甲醇能力低，且菌株表现型为Muts。存在AOX1,细胞利用甲醇正常生长，这种菌株表现型为Mut+。

酵母蛋白表达载体：

? ? ? 根据产物存在位置，可以将酵母表达分为胞内表达和胞外表达两种方式。这取决于表达载体上是否有信号肽存在。酵母表达系统主要是依据基因定位及实验目的，选择合适的表达载体。

（1）胞内表达载体:主要包括pPIC3、pPICZ、pPSC3K、pHIL-D2等。这类载体使得目的基因在胞内表达,同时避免表达蛋白的糖基化。适合于通常在胞浆表达或不含-S-S-的非糖基化蛋白，与胞外分泌蛋白相比，胞内表达水平高但纯化相对繁琐，而且一般为包涵体形式，需要增加复性步骤

（2）分泌到胞外表达的载体:pPIC9、pHIL-S1、pYAM75P等。信号肽决定外源蛋白可以分泌到胞外，且可溶性表达。除此之外，有利于目的蛋白的纯化和积累。

?（3）多拷贝插入表达载体:pPIC9K、pPIC3.5K。拷贝数增加则蛋白的表达量也会增加。

? ? ? 卡梅德生物（KMD Bioscience）建立了一套完整的蛋白表达，蛋白发酵，蛋白小试与中试规模的工艺技术支持